中图分类号：R954 文献标识码：B 文章编号：100120025(2001)0620347203 在注射剂生产过程中，微生物一直是影响药品质量的关键因素之一。空气净化系统和灭菌系统是控制微生物的关键环节，其中灭菌系统又是重中之重。本文以高压蒸汽灭菌为例，对灭菌效果的验证进行探讨。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料 高压蒸汽灭菌柜(SO092w，日本樱花精机株式会社)，标准温度探头(Pt100，日本PKC公司)，温度探头(Pt100，美国Datatrace公司)，油浴(RC6CP，美国Lauda公司)。生物指示剂(美国3M公司)。

1.2 温度探头的筛选 分别在使用前后将温度探头与标准温度探头放入油浴中，设定油浴温度为12111e。待油浴温度恒定3min后，将温度探头从油浴中取出，用专用读取仪将储存在探头内部的温度读出，检测情况见表1。使用前后温度探头偏差漂移应<0.5e。由表1

可见，1号探头的偏差漂移大于规定值，6号探头出现故障，因此1号和6号探头不能使用，2、3、4、5、7号探头可以使用。 1.3 空载热分布实验将2、3、4、5、7号温度探头随机均匀分布在高压蒸汽灭菌柜内，重复运行3次灭菌程序，测定F0值F0值是通过温度和时间由积分计算得到的数值F0>8示灭菌柜的性能达到要求。温度探头在灭菌柜的具体位置见图1。

1.4 满载热分布实验 将50ml、500ml、2000mlSHOTT瓶和灭菌服等装入灭菌柜，并将5个温度探头随机均匀分布在装载物中运行3次灭菌程序，测定F0值。温度探头在装载物中的具体位置见图2。

1.5 微生物挑战性实验 按实际灭菌情况，将灭菌柜满载。在最冷点放置2个生物指示剂(biologicalindicator，BI)，灭菌后将BI放入56e恒温培养箱中培养48h，观察颜色变化。紫色为阴性，阳性对照为黄色。

2 结果 空载热分布实验的F0值见表2，

在灭菌过程中灭菌柜的F0值均>8。空载时最冷点的位置见图3，为上层中间左侧区域。满载热分布实验的F0值见表3。可以看出，F0值与空载热分布实验相比有所下降，但各点均>8。最冷点位于2000mlSHOTT瓶内，与位置无关。

微生物挑战性实验中，1、2号BI均呈紫色(阴性)，显示灭菌效果符合要求。

3 讨论

3.1 验证产生背景 在以往的制药过程中，往往通过检验产品是否无菌来判定灭菌效果。但在20世纪70年代，美国出现了几起产品灭菌后又被污染导致患者死亡的案例[1]，这说明必须对整个灭菌过程加以控制。为此，中国药典2000年版将灭菌法收入通则附录，为将灭菌的定性控制纳入定量控制创造了必要的条件。

3.2 验证结果分析 在高压蒸汽灭菌中，蒸汽是杀死细菌的介质，它灭菌的机制是使细菌中主要蛋白质及核酸变性。为了体现一定温度下的灭菌效果，引入了热致死时间F0[2]。 F0定义为与121e时灭菌等效的时间，通过F0值可以定量地判断灭菌效果。F0值越大，灭菌效果越好。本实验中空载与满载状态下高压蒸汽柜内最冷点的确定是通过测定F0值得到的。空载时最冷点为蒸汽柜内上层中间左侧区域，即蒸汽进口处的不锈钢挡板区域，此挡板可以帮助蒸汽迅速充满灭菌柜，但却阻碍了蒸汽直接到达此位置，所以为最冷点。满载时柜内的最冷点位于2000mlSHOTT瓶内，与位置无关。这是因为2000mlSHOTT瓶容积最大，热穿透所需要的时间最长，所以升温最慢，F0值最低。理想状态下空载时应不存在热分布的冷点，如有冷点应找出灭菌设备存在什么问题，是否需要加以改进。但最终的判断标准应是满载状态下F0>8、微生物挑战性试验中BI为阴性。本实验通过在蒸汽柜内最冷点处放置BI来考察柜内的灭菌效果，如果满载时最冷点符合灭菌要求，即说明整个灭菌柜的灭菌效果符合要求。

3.3 验证的意义 在进行高压蒸汽灭菌时，应该有相应的书面资料支持，包括方案的制定，数据的记录和分析，这就是验证。它是一项既有相当的技术难度，又需要较大投入的工作。但是实施过程中，它可以避免由于灭菌不彻底而造成的不合格产品的产生，因此验证所带来的效益要远大于增加的成本。严谨、可靠的验证工作是产品质量的根本保证。

4 参考文献 [1] FrederickJC，JamesPA.上海医药行业协会译.无菌制剂工艺的验证[M].第2版.上海：上海科学普及出版社，1998.1[2] PongiluppisGS.Microbiologicvalidationintheproductionofsterilepharmaceuticals[J].ChimPharm，1991，130(6)：2032212.