小核酸固相合成起使物料选择方法及质量控制策略

生物制药合伙人 2025-05-27

关于小核酸固相合成起始物料选择方法及质量控制策略的详细解答。

以下是关于小核酸固相合成起始物料选择方法及质量控制策略的详细解答：

一、起始物料选择方法

1. 基本原则

结构重要性：起始物料需是原料药结构的重要组成部分（如核苷酸单体、固相载体等），避免选择与终产物结构过于接近的中间体。

合成步骤：起始物料与终产物之间应有足够多的合成步骤（通常≥2步），确保杂质可控。例如，ICH Q11强调合成步骤需涉及共价键形成或断裂。

商业可得性：优先选择市场可稳定供应的物料，若为定制合成需提供供应商资质证明及工艺描述。

质量控制能力：供应商需具备完善的质量体系，能明确物料杂质谱（如残留溶剂、基因毒杂质等），并提供分析方法。

2. 具体选择依据

树脂选择（固相合成载体）：

类型：聚苯乙烯（PS）树脂（成本低，适合长链）、聚乙二醇（PEG）树脂（高载量、高稳定性）。

参数：载量（50-350 μmol/g）、粒径（50-200 μm）、溶胀性（乙腈中3-5 mL/g）、功能基团（羟基、氨基等）。

应用建议：短链选CPG或高载量PEG，长链选PS或PEG，高纯度需求选PEG

核苷酸单体：

修饰类型：2'-OMe、2'-F、硫代磷酸酯（PS）等，需根据药物设计选择化学修饰单体。

供应商资质：优先选择通过GMP认证的供应商，如蓝晓科技等。

3. 监管要求对比

FDA：要求起始物料为原料药结构片段，需明确杂质谱，合成步骤≥2步。

EMA：强调合成路线需覆盖关键步骤（如基因毒杂质控制），不接受仅以“商业可得”为理由选择起始物料。

ICH Q11：基于科学和风险评估，需综合所有原则（如杂质控制、工艺稳健性）而非单一标准。

CDE：要求起始物料符合ICH及欧盟标准，供应商需配合现场检查并提供变更声明。

长期大量供应小核酸固相合成载体（树脂）：聚苯乙烯（PS)氨基核酸固相合成载体，羟基固相合成载体，Unylinker 羟基载体，预载DNA核苷酸及RNA核苷酸羟基载体，GalNAC-NH固相合成载体等，PEG修饰PS小核酸合成树脂，PEG合成小核酸载体，同时供应各种核酸药物纯化填料，纯化工艺开发。

二、质量控制策略

1. 合成过程控制

脱保护：使用二氯乙酸（DCA）或三氯乙酸（TCA）去除DMT保护基，控制反应时间避免脱嘌呤。

偶联：活化剂（如四氮唑）与核苷酸单体混合，确保偶联效率＞98%，减少N-1杂质。

氧化：碘溶液氧化亚磷酸酯为磷酸三酯，硫代修饰需控制硫代异构体比例（如RP/SP构型）。

封端：醋酸酐封端未反应羟基，防止副产物累积。

2. 杂质控制关键杂质：

N-1/N+1杂质：通过HPLC或毛细管电泳（CGE）检测，控制单杂≤0.1%，总杂≤2%。

硫代异构体：使用手性HPLC或质谱（MS）分析，确保比例符合安全范围（如40:60~60:40）。

残留溶剂：GC检测乙腈、二氯甲烷等，限度参考ICH Q3C。

纯化策略：

粗品超滤：去除低分子量杂质。

色谱纯化：强阴离子交换（SAX）或反相HPLC分离全长产物。

最终超滤：去除缓冲盐和溶剂。

3. 分析方法

鉴别：质谱（MS）确认分子量，熔解温度（Tm）分析双链结构。

含量测定：UV法结合色谱纯度校正，或HPLC-MS定量。

稳定性：加速试验评估降解产物，重点关注脱嘌呤、氧化修饰等。

4. 供应商管理

审计：定期审核供应商生产与质控体系，确保工艺一致性。

变更控制：供应商工艺变更需提前通知，并进行可比性研究（如杂质谱对比）。

三、总结

小核酸固相合成的起始物料选择需兼顾结构合理性、工艺可控性及监管合规性，质量控制需贯穿合成、纯化和分析全流程。通过严格的供应商管理、多维度杂质控制及正交分析方法，可确保终产物符合临床安全要求。

责任编辑：邵丽竹

审　　核：何发

小核酸固相合成起使物料选择方法及质量控制策略

评论 0

热点文章