HPLC-ELSD 法测定九味沉香胶囊中黄芪甲苷的含量

赵姗姗李丽靳利王伟达李丹杨双杰 2026-05-27

本文旨在建立高效液相色谱蒸发光散射法（HPLC-ELSD）检测九味沉香胶囊中黄芪甲苷含量的分析方法，进一步完善该制剂的质量控制标准。本研究采用高效液相色谱 - 蒸发光散射检测法（HPLCELSD），对九味沉香胶囊内黄芪甲苷的含量进行测定。色谱条件设置为：色谱柱采用 Agilent 5 TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈 - 水（32 ∶ 68），等度洗脱，流速为 1.0 mL/min，柱温为 30℃，漂移管温度为 110℃，载气流速为 1.6 L/min。结果显示，在 8.02 ～ 80.20 μg/mL 的浓度范围内，黄芪甲苷的进样浓度与对应峰面积呈现良好的线性关系（R=0.9997）。方法验证结果表明，黄芪甲苷的平均加样回收率为 97.6%，相对标准偏差（RSD）为 2.6%（n=6）。本研究建立的测定方法准确高效，适用于九味沉香胶囊中黄芪甲苷的含量分析。

九味沉香胶囊^[1]（原名：九味心脑康胶囊）的组方源于清代藏蒙医学家罗桑群佩所著《藏医药选编》所载的八味沉香散，并结合现代心脑血管疾病治疗相关文献反复优化而成。本品现由河南诺美药业有限公司独家生产，每粒重 0.3 g，处方包含沉香、肉豆蔻、当归、黄芪、西洋参等九味药材。其功能为益气行滞、通络止痛，适用于心脑血管相关病症。在藏医理论中，该药具有调和隆血、镇痛、宁心安神的作用，主治心隆症、黑脉病、隆血不调等病症。本品现行质量标准为 WS-10854(ZD-0854)-2002-2012Z，标准中采用薄层色谱法鉴别西洋参、黄芪与当归，以薄层扫描法测定黄芪甲苷含量，以此保障产品质量稳定。此前已有学者对该品种的质量控制开展过相关研究^[2-3]。

在实际检测过程中，采用薄层色谱法测定黄芪甲苷含量时，常出现斑点拖尾、扩散或显色不清晰等问题，该方法对操作人员技术水平和展开环境条件要求较为严格。同时，薄层扫描法的测定误差通常大于高效液相色谱法，且结果的重现性相对较差。参考有关文献方法后^[4-12]，我们改用高效液相色谱 - 蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）进行测定。结果表明，该方法用于该制剂的含量分析准确度较高，灵敏度良好。

Part1 仪器与试药

1.1

仪器

本研究所用仪器包括：高效液相色谱仪（Thermo UltiMate 3000）、蒸发光散射检测器（ELSD 2000ES）、薄层色谱扫描仪（KH-2100 型）。

1.2

材料

本研究使用的材料包括：黄芪甲苷（批号：110781-202219，中国食品药品检定研究院）；硅胶G薄层板（规格：100 mm×200 mm，青岛谱科分离材料有限公司），乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯；九味沉香胶囊（批次：250101、250102、250103）为河南诺美药业有限公司生产的成品；提取溶剂 I 为自行配制，量取 4 ml 浓氨试液，加入 80% 甲醇溶液定容至 100 ml，混匀即得。

Part2 方法与结果

2.1

色谱条件及系统适用性试验

采用 Agilent 5 TC-C18 色谱柱（规格为 5 μm，250 mm×4.6 mm），以体积比 32 ∶ 68 的乙腈 - 水为流动相，柱温维持为 30℃，流速设定为 1.0 mL/min。蒸发光散射检测器参数设置为：雾化器温度为 110℃，蒸发管温度为 110℃，载气流速为 1.6 L/min。系统适用性要求为：按黄芪甲苷峰计算，理论塔板数不低于 4000。

分别取黄芪甲苷对照品溶液、九味沉香胶囊供试品溶液及黄芪阴性对照溶液各 10 μL，按照上述色谱条件进样分析。结果显示，阴性样品无干扰峰，黄芪甲苷峰的理论塔板数均高于 4000，目标峰与邻近杂质峰的分离度均大于 1.5。对应的色谱图见图 1、图 2 和图 3。

图 1 对照品 HPLC 图谱

图 2 供试品溶液 HPLC 图谱

图 3 阴性对照 HPLC 图谱

2.2

对照品溶液制备

精密称取适量黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解并定容，制备得浓度约为 20 μg/mL 的对照品溶液。

2.3

供试品溶液制备

取胶囊内容物研细，精密称取约 2 g，置于具塞烧瓶中，精密加入提取溶剂 I 50 ml，称定总重量后水浴回流 3 h，取出放冷后再次称重，用提取溶剂 I 补足减失的重量，摇匀后过滤，精密量取 25 ml 续滤液，蒸干。残渣加 5 ml 水微热使溶解，而后上样至内径 1.5 cm、柱高 15 cm 的 D101 型大孔吸附树脂柱，依次用 70 ml的水、70 ml 的 40% 乙醇、100 ml 的 80% 乙醇洗脱。收集 80% 乙醇洗脱液，蒸干，残渣用 80% 甲醇溶解，转移至 10 ml 量瓶中并定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.4

阴性溶液制备

依据九味沉香胶囊的处方组成及制备工艺，制备不含黄芪药材的阴性对照样品溶液。

2.5

专属性试验

将黄芪甲苷对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液分别进样，进行高效液相色谱分析。结果显示，供试品溶液在与对照品色谱峰对应的保留时间位置，出峰保留时间一致；而阴性样品溶液未出现对应色谱峰，说明阴性样品不会干扰黄芪甲苷的测定，该方法专属性良好。色谱图见图 1、图 2 和图 3。

2.6

线性关系考察

精密称定适量黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解并稀释，配制成浓度为 8.02 μg/mL、16.04 μg/mL、20.05 μg/mL、40.10 μg/mL、80.20 μg/mL 的系列对照品溶液，依次进行测定。以各浓度对应的峰面积（Y）为纵坐标，质量浓度（X）为横坐标绘制曲线，得到黄芪甲苷的线性回归方程为：Y=2.0560X+0.4123, 相关系数 r=0.9997（n=5），结果表明黄芪甲苷进样浓度在 8.02 ～ 80.20 μg/mL 范围内线性关系良好。

2.7

精密度试验

精密吸取质量浓度为 20.05 μg/mL 的对照品溶液10 μL，按照上述方法连续测定 6 次，测得黄芪甲苷 6次峰面积的 RSD 为 1.01%，表明该方法精密度良好。

2.8

重复性试验

取批号为 250103 的九味沉香胶囊制剂，平行制备6 份供试品溶液，按照上述方法测定。结果显示，黄芪甲苷平均含量为 68 μg/ 粒，RSD 为 1.33%（n=6），表明该方法重复性良好。

2.9

稳定性考察试验

分别在 0 h、2 h、4 h、8 h、12 h 对同一供试品溶液进行测定，结果显示黄芪甲苷面积的 RSD 为 1.3%，表明供试品溶液在 12 h 内稳定性良好。

2.10

加样回收率试验

精密称取批号为 250103 的样品 6 份（该批次平均装量为 0.2962 g，黄芪甲苷含量为 69 μg/ 粒），分别精密加入适量黄芪甲苷对照品进行试验。结果显示，平均回收率为 97.6%，RSD 为 2.6%（n=6），结果见表 1。

表 1 加样回收率实验结果（n=6）

2.11

耐用性考察

分别在柱温为 28℃、30℃、35℃的条件下检测黄芪甲苷含量，测得黄芪甲苷含量的 RSD 值为 1.86%，小于 2.0%，说明该方法在柱温为 28℃～ 35℃范围内耐用性良好；分别在流速为 0.9 mL/min、1.0 mL/min、1.1 mL/min 的条件下测定黄芪甲苷含量，计算得到相对标准偏差（RSD）为 1.53%，该值低于 2.0%，结果表明，所建立的分析方法在流速为 0.9 mL/min ～ 1.1 mL/min 范围内具有良好耐用性。使用岛津科技有限公司的InertSustain C18 色谱柱与 Agilent 5 TC-C18 色谱柱进行实验时，所得黄芪甲苷峰的峰形与分离度均表现良好。

2.12

样品含量测定

分别取 3 批样品（批号：250101、250102、250103），按照建立的方法测定供试品中黄芪甲苷含量，结果分别为 78 μg/ 粒、80 μg/ 粒、69 μg/ 粒；同时采用九味沉香胶囊标准项下规定的薄层扫描法测定含量，结果分别为40 μg/ 粒、38 μg/ 粒、35 μg/ 粒。

Part3 讨论

3.1

供试品溶液制备方法选用

根据文献资料^[4-11]，现有研究中制备供试品溶液的方法（即黄芪甲苷的分离纯化步骤）主要包括甲醇超声提取、正丁醇萃取，可搭配氨试液洗涤，也可采用水或不同浓度乙醇经大孔树脂、SPE 柱洗脱后，用甲醇定容制备供试品。本研究目前采用的供试品制备方法仍偏复杂，后续仍需探索更简便、可靠的方案，例如可考虑使用回流碱化衍生法^[5]结合大孔树脂洗脱或其他改进措施，从而减少操作误差，提升工作效率。

在提取时间的考察实验中，分别考察了回流 3 h、回流 1 h、回流 30 min 及超声 1 h 四种条件下黄芪甲苷初提取液的制备效果，采用 2.1 节确定的色谱条件及供试品制备方法，对 250102 批次样品进行测定。其中超声30 min 提取所得样品的峰面积较小，其余三种条件测得的黄芪甲苷含量分别为 0.02691%、0.0250%、0.02261%；结果表明，随着回流提取时间延长，测得的黄芪甲苷含量逐渐升高，因此最终选择 3 h 作为提取时间。

3.2

样品测定结果的对比

分别采用本研究建立的方法与原标准规定的薄层扫描法对样品进行检测，结果显示本方法的测定值高于原标准方法，该情况已有相关文献报道^{[7, 12]}，提示两种检测方法的灵敏度存在较大差异。黄芪甲苷是黄芪的有效成分标志物，它在心脑血管疾病治疗中的药理活性已有明确研究 ^[13-16]。因此，生产企业在开展黄芪品质提升、生产工艺优化和产品质量控制相关研究的同时，也应重视临床药效物质的评价工作。

3.3

小结

HPLC-ELSD 法可作为内控方法，用于九味沉香胶囊中黄芪甲苷的含量控制，建议对该产品的现有质量标准开展进一步深入研究，以更好地把控产品质量。

致谢

感谢中原工学院王磊博士、河南省科学院高新技术研究中心刘双燕博士、安阳市市场监督管理局齐利老师给予的指导。

参考文献

[1] 国家食品药品监督管理局 . 国家食品药品监督管理局药品标准：WS-10854(ZD-0854)-2002-2012Z[S]. 2012.

[2] 李志平，王加良，张艳丽，等 . 一测多评法同时测定九味沉香胶囊中 9 种成分 [J]. 中成药，2020，42(5)：1129-1134.

[3] 杨凤梅 . 九味心脑康胶囊中黄芪甲苷和人参皂苷 Rg1 的定量分析 [J]. 中成药，2002(3)：186-188.

[4] 赵小强，赵静，张浩波，等 . 黄芪甲苷的提取、分离、纯化及其药理作用的研究进展 [J]. 华西药学杂志，2022，37(6)：711-716.

[5] 杜茂波，张敏，沈硕，等 . 黄芪中黄芪甲苷含量测定的新方法探讨 [J]. 中国实验方剂学杂志，2020，26(6)：132-137.

[6] 高威，张颖，陈尚昆 . HPLC-ELSD 法测定芪冬养血胶囊中黄芪甲苷的含量 [J]. 中国药品标准，2017，18(3)：190-193.