探讨细胞疗法中T细胞激活培养的关键原料

ACRO空气猫 2022-12-27

T淋巴细胞在人体免疫系统中扮演重要的角色，其在体内处于抑制或耐受状态会导致免疫力下降，从而引起感染与肿瘤等发生。T细胞在体内活化需要TCR/CD3识别APC表面的MHC-肽复合物提供的第一信号以及CD28／B7、LFA-1／ICAM-1等协同刺激分子相互作用提供的第二信号，并有研究显示，T淋巴细胞在接受第一信号之后，如果不能接受第二信号的刺激，则将迅速呈低反应性或失能。

近年来，在体外诱导活化的T淋巴细胞用于过继性免疫治疗成为热点，常使用抗CD3抗体和抗CD28 抗体来模拟体内的第一和第二刺激信号过程来激活T细胞，它们是体外刺激T细胞培养不可或缺的试剂。

MHC/抗原肽-TCR提供第一信号，共刺激分子提供第二信号

OKT3抗体和抗CD28 抗体的应用

CAR-T细胞培养

目前成熟的CAR‑T细胞产品制备方法通常包括从患者体内采血、分离T细胞、激活T细胞、CAR基因修饰T细胞获得CAR‑T细胞、扩增CAR‑T细胞，随后将扩增获得的CAR‑T细胞配成制剂后对患者进行回输这些主要步骤，其中T细胞的离体扩增需要持续的、适当的激活，目前最常用的T细胞激活方法为用CD3抗体和抗CD28抗体包被多孔板后刺激或使用人工抗原呈递细胞(AAPC)刺激，也可使用CD3抗体和抗CD28抗体包被的磁珠或纳米珠刺激，也有研究MSLN CAR-T的科学人员考虑到，这种方式可能会造成T细胞耗竭且成本较高，他们在分选获得T细胞后首先将针对MSLN的CAR基因导入T细胞，然后再使用MSLN抗原与抗CD28抗体一起共同刺激T细胞的操作，结果不仅降低了成本且还具有更高的CAR表达阳性率。

TIL细胞培养

肿瘤浸润淋巴细胞(TIL细胞)是一群从血液中迁移至肿瘤处发挥作用的淋巴细胞，这群细胞对肿瘤细胞具有特异性的杀伤作用。但是TIL的临床使用细胞量达到6x10⁹细胞以上，且需要多个疗程治疗，这就需要在短时间内获得大量TIL。Rosenberg开发的TIL细胞体外扩增方法是目前通用的TIL细胞培养方法，用胶原蛋白酶将肿瘤组织消化后，将存在肿瘤组织中的浸润淋巴细胞分离出来，使用含有2000‑6000IU/ml rhIL‑2培养基进行体外诱导出TIL细胞后，再使用含有CD3和CD28抗体培养基进行扩增，进行临床使用。但这种方法的周期较长，且CD3+CD8+杀伤性T细胞的比例较低，针对这些问题，研究人员在培养基中添加合适的IL‑7或IL‑15、IL‑2、TNF‑α、CD3抗体和CD28抗体等来摸索相应的培养体系，可将诱导时间缩短至7天左右(超过2*10⁶细胞长出)，25‑30天内即可扩增至临床所需数量，极大的缩短了TIL细胞体外扩增周期，增加了疗法的及时性，同时可获得较高比例的CD3+CD8+T细胞，提高临床疗效。

Treg细胞的激活培养

Treg细胞（调节T细胞），或称为抑制性T细胞，是免疫调节系统维持对自身抗原的耐受性和预防自身免疫疾病的T细胞亚群。有多项研究表明，对Treg细胞进行调控可以治疗自身免疫性疾病和癌症，并有利于器官移植和伤口愈合。临床上应用Treg细胞治疗疾病，单次至少需输注1×10⁹个细胞，而外周血中的Treg细胞仅占单个核细胞的1‑2%，至少需扩大培养50‑100倍才能满足临床需要。目前培养Treg细胞常用的手段为使用CD3/CD28抗体偶联磁珠或CD3抗体\CD28 抗体，并在培养基中添加IL‑2和TGF‑β等生长因子，来对外周血分离的Treg细胞进行激活刺激。

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