本研究采用 UPLC 法建立定量检测方法，并完成方法学验证及样品含量测定。

为全面明确样品的物质基础、整体把控制剂质量，进一步建立了本品的 UPLC 特征图谱分析方法。

取钩藤（钩藤）对照药材 0.5 g，加入 70% 甲醇20 ml，超声处理 20 min，放冷后摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。另分别取儿茶素对照品、绿原酸对照品、去氢钩藤碱对照品、钩藤碱对照品适量，精密称定，加甲醇分别配制为每 1 ml 含儿茶素 40 μg、绿原酸 50 μg、去氢钩藤碱 40 μg、钩藤碱 0.1 mg 的溶液，作为对照品参照物溶液。

取“2.6”项下正交试验所得干膏粉适量，研细，精密称取约 0.1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 25 ml，密塞后称定重量，超声处理 30 min，放冷后再次称定重量，用 70% 甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

在“2.3.1”项色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液进样，测定特征图谱，参照国家钩藤（钩藤）配方颗粒标准（YBZ-PFKL-2021052）^[6] 计算特征峰比值。

参考陈士林 ^[7]《中药饮片标准汤剂》中的出膏率测定方法计算出膏率：取钩藤药膏，过滤后精密吸取滤液，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后移入烘箱，于 105℃烘干3 h，取出冷却 1 h 后，转移至相对湿度为 25% 的干燥器中放冷至室温，用万分之一天平精密称定重量，按下列公式计算。

式中，W1 为蒸发皿恒重与干膏重之和；W2 为蒸发皿恒重；M 为饮片投料量；m1 为药膏总重量；m2 为量取的药膏重量。

以多维度评价指标为基础，分别通过主观、客观赋权法计算权重，并整合得出组合综合权重。

根据各指标对钩藤（钩藤）配方颗粒提取工艺的贡献值，确定含量、特征图谱比值、出膏率共3项评价指标，其先后顺序为：含量＞特征图谱比值＞出膏率，据此建立优先判断矩阵，评分结果见表3。根据表3进行层次矩阵分析，得出含量、特征图谱比值、出膏率的归一化权重W_t-AHP分别为0.5396、0.2970、0.1634，一致性比例因子CR值为0.0079（＜1），通过一致性检验。

表 3 钩藤（钩藤）配方颗粒评价指标的判断矩阵评分表

按照熵权 ^[8-11] 赋权步骤，以含量、特征图谱比值、出膏率 3 项评价指标建立原始矩阵（X）=（X_ij）_m×n，X_ij 表示第 j 个评价对象第 i 项评价指标的取值。

将 X 转化为概率矩阵（P），并计算 P 值，P=（P_ij）_m×n（P_ij表示第 j 个评价对象第 i 项评价指标下的概率）。

再分别按照下列公式计算第 i 项评价指标的信息熵值（H_i）和权重 W_i-EWM。

通过计算，含量、特征峰比值、出膏率 3 个评价指标的 Wi 分别为 0.4078、0.4134、0.1787。

按照下列公式计算综合权重（W 综合），含量、特征图谱比值、出膏率三个评价指标的 W 综合分别为 0.5915、0.3230、0.0785。

在明确各评价指标综合权重的基础上，优选关键工艺参数，采用正交试验设计优化钩藤配方颗粒提取工艺。

在前期研究的基础上，本研究以浸泡时间（A）、加水量（B）、提取时间（C）三个因素为考察对象，设定各考察对象的不同水平，因素水平见表 4。

表 4 提取工艺考察因素水平表

本研究以成分含量、特征图谱比值、出膏率为评价指标，进行 L₉(3⁴) 正交试验，试验结果见表 5。

表 5 正交试验结果

根据正交试验结果（见表 5）的直观分析可知：各考察因素中，对出膏率存在显著影响的是因素 B（加水量）；对总成分含量存在显著影响的是因素 A（浸泡时间）、因素 C（提取时间）；对特征图谱比值存在显著影响的是因素 A（浸泡时间）。进一步开展方差分析，结果见表 6，在综合评价中因素 A 具有显著性影响，因素 B、因素 C 的 K2、K3 相对差异较小，对综合评分的影响不显著。综合各项指标分析可知，试验 2 对应方案的综合评分最高，为 98.944 分，即最佳提取工艺为 A₁B₂C₂。结合实际生产中节约能源、便捷操作等因素，本研究最终优选得到的最佳提取工艺为：沸水投料，分别加入 10倍量水、8 倍量水提取 2 次，每次提取 0.5 h。

表 6 综合方差分析结果

根据优选得到的最佳提取工艺进行 3 批验证试验，并按国家钩藤（钩藤）配方颗粒标准（YBZPFKL-2021052）^[6] 对产品进行检验，检验结果见表 7。结果表明，经本次优化所得的工艺稳定可行，所生产的产品质量符合要求。

表 7 中试 3 批出膏率及干膏粉质量检验结果

Part3 讨论

本研究在正交试验基础上运用熵权法，以浸泡时间、加水量、煎煮时间为考察因素，通过出膏率、四种生物碱（异钩藤碱、异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱、钩藤碱）总含量及特征图谱比值的综合权重进行评价，优选得到钩藤（钩藤）配方颗粒的最佳提取工艺：沸水投料，提取两次，第一次加 10 倍量水，提取 0.5 h ；第二次加8 倍量水，提取 0.5 h。该方法操作简便、节约能耗，对于含有需特殊煎煮“后下”类中药的方剂，建议在提取工艺的研发设计中予以重视 ^[12]。该方法可在保证出膏率的基础上提升有效成分含量，且特征图谱比值等其余检验项目均符合国家标准，能够为工业化生产符合国家药品标准的钩藤（钩藤）配方颗粒提供可靠的理论依据，具备实际指导意义。

本研究仅针对钩藤（钩藤）配方颗粒的提取工艺展开探究，前端的药材管控对产品质量同样具有至关重要的影响。钩藤是典型的多基原药材 ^[13]，近现代认为其品质以双钩、质嫩、色红者为佳 ^[14]，不同产地的钩藤药材成分能够保持一定程度的稳定性 ^[15]。但目前市场上钩藤药材质量参差不齐，在确定药材基原的基础上，药材的颜色深浅、粗细程度、茎和钩的比例，都会对钩藤（钩藤）配方颗粒的有效成分含量、特征图谱产生一定影响。此外，鲜药材采用不同的初加工方式，不仅会改变药材的外部形态及颜色，还会对其品质产生一定的影响，各批次主成分含量差异显著 ^[16]。因此，钩藤的药材质控及产地加工工艺仍需进一步探讨。

钩藤药材质地轻泡，采用多功能提取罐提取虽可生产出符合国家药品标准的药品，但仍存在局限性：部分药材漂在液面上方，在煎煮初始阶段难以充分煎透。而由于本品种为茎枝类药材，纤维占比大，若采用动态提取，物料在循环过程中流动性差，循环不畅，易造成动态设备管道堵塞，导致生产难以顺利推进。综合以上因素考虑，针对质地轻泡药材品种的配方颗粒生产，如何通过促进溶液流动循环使药材与溶媒充分接触，实现有效成分快速溶出，并针对性引进更先进的提取设备，仍需进一步探讨。