中药材五味子为木兰科植物五味子的干燥成熟果实,其主要功效为收敛固涩、益气生津、补肾宁心,用于久嗽虚喘,梦遗滑精,遗尿尿频,久泻不止,自汗盗汗,津伤口渴,内热消渴,心悸失眠[1],是中药制剂五味子颗粒的主要原料。相关文献研究表明,五味子含有木脂素、有机酸、挥发油、多糖、氨基酸、鞣质等多种化学成分,其中木脂素具有护肝、抗氧化的作用,挥发油、有机酸具有祛痰、镇咳的作用,多糖具有抗衰老、提高免疫力的作用[2-4]。本文的研究采用正交试验方法,对五味子提取时间、溶媒用量、提取次数等工艺进行优选,为五味子颗粒及相关中药制剂的研发,提供必要的参考依据。
1 实验材料
1.1 设备
CS-100型粗碎机,1793型索氏提取器;HH-S型数显水浴锅,电加热套;N-3000N-3010-10L旋转蒸发仪,SHB-III型循环水式多用真空泵,CH-10槽型混合机,YK-60摇摆制粒机,CT-C热风循环烘箱。
1.2 原辅料
五味子药材、药用乙醇、玉米淀粉、糊精、蔗糖等原料、辅料,经检验符合《中国药典》现行版质量标准。
2 方法与结果
2.1 提取工艺的因素水平的确定
称取原药材五味子600g(可制成五味子颗粒2000 g),经挑选、粗碎后置于索氏提取器浸泡1 h后开始进行提取,提取液分别真空减压浓缩至料液比1:1(g/mL),加入3倍量乙醇静置24 h,上清液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.2稠膏。选择提取时间(A)、纯化水用量(B)、提取次数(C)3个影响因素,每个因素设3个水平。五味子提取工艺的正交试验因素水平如表1所示。
2.2 实验方法与结果
采用L9(3)4正交表安排试验,以五味子颗粒浸膏收率和浸膏粉的五味子醇甲含量为考察指标。五味子提取工艺的正交试验安排及结果如表2所示,浸膏收率方差分析结果如表3所示,五味子醇甲含量方差分析结果如表4所示。
从正交试验的结果和方差分析得知:各因素、水平之间无显著差异,影响最大的因素为C,影响因素的主次顺序为C>A>B。最佳提取工艺为A2B2C3,即提取时间为180 min、纯化水用量16倍、提取3次浸膏粉的五味子醇甲含量高,且浸膏收率最高。
2.3 结果分析
优选的五味子提取工艺为:提取时间为180 min、纯化水用量为16倍量、提取3次,浸膏收率和浸膏粉的五味子醇甲含量最高。
结合小试的实际情况,综合考虑降低工时、节约能源等因素,五味子颗粒最佳提取工艺为:第1次纯化水用量为8倍量,提取时间为60 min;第2次纯化水用量为4倍量,提取时间为60 min;第3次纯化水用量为4倍量,提取时间为60 min。之后进行中试实验验证。
2.4 提取中试验证
2.4.1 五味子提取中试工艺验证
按以上拟定的提取工艺进行5次中试实验验证,每次按五味子颗粒每袋装10 g的量制备200袋(即2 000 g),取五味子药材600 g,经挑选、粗碎后置于多功能微型提取浓缩机组,浸泡1 h后开始提取、减压浓缩。第1次纯化水用量为8倍量,提取时间为60 min;第2次纯化水用量为4倍量,提取时间为60 min;第3次纯化水用量为4倍量,提取时间为60 min。提取液分别真空减压浓缩至料液比1:1(单位g/mL),加3倍量乙醇静置24 h,上清液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.2稠膏。
2.4.2 合格标准
浸膏密度:(热测)1.2±0.1。
浸膏收率:五味子浸膏收率不低于20%。
含量测定:每袋浸膏粉含五味子醇甲不得少于1.30 mg。
2.4.3 检测结果对比
经过5次中试实验,每次取样对浸膏密度、浸膏收率以及每袋浸膏粉的五味子醇甲含量进行检测,其检测结果如表5所示。
结果表明,通过对浸膏测定检测结果的对比,五味子提取的浸膏密度、浸膏收率和浸膏粉的五味子醇甲含量均符合合格标准。试验表明优选的五味子工艺提取时间、纯化水用量、提取次数等工艺参数重现性好,中试工艺稳定。
2.5 五味子颗粒制粒中试验证
2.5.1 五味子颗粒中试制粒工艺验证
取五味子浸膏粉全量加淀粉400 g、糊精200 g、糖粉1 300 g置于槽型混合机混匀,加70%乙醇制软材,摇摆颗粒机14目制粒,于60 ℃以下低温干燥[5]。每次制备200袋(合2 000 g)按每袋装10 g,连续5次进行制粒工艺验证。
2.5.2 合格标准
颗粒水分:<5.0%。
装量检查:每袋装10 g。
含量检查:每袋含五味子醇甲不得少于1.30 mg。
2.5.3 检测结果对比
经过5次中试实验,每次取样对浸膏密度、浸膏收率以及浸膏粉的五味子醇甲含量进行检测,其检测结果如表6所示。
结果表明,通过对五味子制粒中试结果的对比,五味子颗粒的颗粒水分均小于5.0%,装量检查均控制在10.0 g/袋,五味子醇甲含量检查在1.48 mg/袋至1.56 mg/袋之间,均符合每袋不得少于1.30 mg/袋的标准要求。制粒工艺参数重现性好,中试工艺稳定。
3 结语
本次工艺研究优选的五味子提取工艺参数:第1次纯化水用量为8倍量,提取时间为60 min;第2次纯化水用量为4倍量,提取时间为60 min;第3次纯化水用量为4倍量,提取时间为60 min。五味子提取工艺的参数重现性好,中试工艺稳定,可作为五味子颗粒及相关中药制剂研发的参考依据。对于五味子选用不同浓度的乙醇进行提取,是否对五味子醇甲含量有影响,还有待进行进一步相应的工艺研究。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015:66.
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2024-08-17
2024-09-02
2024-08-09
2024-08-06
2024-08-19
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2024-08-28
本文的目的是为了探讨注射用甲苯磺酸奥马环素的无菌方法开发及验证。通过采用薄膜过滤法,使用1mol·L-1硫酸镁溶液对样品及所用培养基进行处理,pH 7.0 氯化钠蛋白胨缓冲液(含 0.1% 组氨酸、0.3% 卵磷脂和 3% 吐温 80)进行冲洗,有效地消除了样品的抑菌性。得出的结论为采用 1 mol·L-1 硫酸镁溶液及 pH 7.0 氯化钠蛋白胨缓冲液(含 0.1% 组氨酸、0.3% 卵磷脂和 3% 吐温 80)可以有效地消除注射用甲苯磺酸奥马环素的抑菌性能,可以将该方法用于注射用甲苯磺酸奥马环素的无菌方法验证。
作者:印萍
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