生物载荷的取样涉及冲洗水取样，擦拭或者接触碟。生物载荷的冲洗水取样必须包括无菌取样容器的使用。一个细致的取样技术对任何微生物方法都是被要求的，以避免取样的外部污染。

内毒素取样总是采用冲洗水取样。关于微生物评估的这些取样技术，对于生物技术不是唯一的。

取样回收研究一般都是要求的，充分显示如果存在在设备表面，残留能够通过分析方法的结合和取样程序进行监测和定量。这些研究为使用检测残留的取样和分析方法提供了科学依据。下面讨论了三种取样回收：擦拭取样回收，冲洗水取样回收以及“目检”回收。

对于擦拭和冲洗水取样，回收研究作为分析方法验证的一部分进行，或者可以作为单独的研究进行，一旦决定分析方法能够在溶液中检测出残留。取样回收研究是实验室研究，包括不同材质的被取样设备的取样片（如，不锈钢，玻璃，PTFE和硅胶），带有残留以检测。

1、总则

回收研究对于已知是水溶的并且低于溶解限度的某些残留是不需要的，如，作为清洁剂的氢氧化钠或者磷酸。

在进行擦拭和冲洗水取样回收研究中，带有材质的取样片的数量应代表等同于代表残留限度的数量，这也代表了最差条件。

标记的残留应是与警戒过程结束时出现的一样的残留。对于生物技术蛋白活性物，实际是降解的蛋白质碎片。但是惯例做法是标记主体蛋白活性物质，因为这样更简单并且代表了最差条件。对于大部分生物技术生产，一些生产只对原料药进行回收，其他的将使用早期阶段的产品代表早期阶段的残留。

对于所有取样的表面都应建立回收值。对于擦拭和冲洗水取样，在进行所有表面的回收研究时完成。可替换的选择就是在表面上进行一个残留研究，通过记录的证据，等同于（术语是回收率）其他没有进行正式回收研究的表面。对于回收研究，这是本质的分组或者家族方法。建立分组或家族等值是基于发布的研究或内部的数据。一些公司使用的另一个方法是排除整个设备表面少于小的百分比（如 1%或 2%）取样表面组成的正式回收研究，在这样的情况下，用于排除表面的回收值是任何其他表面种类的最低回收，为此进行正式的取样回收研究或者根据公司程序要求最低可接受回收百分比。

对于擦拭回收研究，取样片使用目标残留溶剂标记，干燥，在清洁验证方案中使用擦拭程序进行取样。在适当的溶剂中擦拭被解吸，在实际样品中测量残留的数量。回收量与取样片上标记的数量进行比较，以回收百分比的形式表示结果。因为擦拭是手工程序，每个人重复进行三次回收研究。最好是至少两个人对每个残留结合和表面种类进行擦拭回收研究。研究所建立的回收百分比可以以不同的方式定义，但是代表性的被定义为任何一个分析者的最低平均回收率。一个可接受的擦拭回收率取决于如何使用擦拭回收率。如果进行的回收率以证明取样方法不具有限度或者分析结果的修正，要求至少70%的回收率。如果回收百分比被用于修正残留限度或分析结果，要求至少50%的回收率。应建立回收百分比的上限。

3、冲洗回收

冲洗回收研究解决了残留冲洗取样的正确性。说明了如果表面有残留，残留将被有效移除并在冲洗液中进行分析。冲洗回收研究像擦拭回收研究一样，在标有目标残留溶液的取样片上进行并允许干燥。对于擦拭取样，在清洁验证方案中使用准确的擦拭程序是必要的。对于冲洗取样，相反的，精确的冲洗程序在实验室中是不能够被复制的。但是， 在实验室中模拟冲洗程序是可以实现的。如果可能，模拟冲洗的条件应该与设备冲洗的情况相同。这包括冲洗溶剂的选择（典型的是水） ，以及冲洗溶剂的温度。在其他的情况下，应选择与设备冲洗条件相同或者最差情况的冲洗条件。比如，取样表面的溶剂比在回收研究中应与设备冲洗条件相同或者低于设备冲洗条件。

模拟冲洗过程的一种方法是在清洁的收集容器之上悬挂标记的取样片并倾倒冲洗溶液到表面至收集容器中。另一种方法是标记适当材质的烧杯底部，允许残留干燥，加入冲洗溶液至烧杯，温和搅拌一段时间，近似于最终冲洗的时间。冲洗溶液从烧杯中由移液管吸出或者倒出并进行分析。第三种选择，这种情况下使用材质的烧杯是不合适的，在烧杯底部放入标记的取样片，模拟冲洗，后续如第二种方法。

因为冲洗取样不典型的依赖于操作者，一个操作人员重复三次以确定回收百分比是充足的。可接受的回收百分比建立在擦拭回收研究同样的水平和条件下。

4、目检中的“回收”

这个过程实际上是确定定量的“目检限度” ，在此，目检是唯一的取样/分析方法并且“目检清洁”被用作给定残留唯一可接受的标准，当对残留缺少擦拭或冲洗取样时。如果目检用来补充擦拭或者冲洗取样，则不需要确定目检限度。特定观察条件下的目检限度可通过在不同水平下（以 μg/cm²）带有残留溶液的设备表面材质标记取样片确定并且通过受训观察人员小组确定在标记表面清楚观察到残留的最低水平。这种目检限度的意义是如果设备表面被确定目检清洁在清洁验证方案中同样（或更严格）观察条件下，擦流水平是低于目检限度的。适当的观察条件包括距离，亮度和角度。目检限度取决于残留的特性以及表面的特性以及检察人员的视觉灵敏度。文献中目检限度报告的标准值是1-4μg/cm²。

5、生物载荷和内毒素取样的回收

回收研究确定表面回收百分比是不恰当的并且对于微生物取样或者内毒素取样是不要求的，原因如下：

1）微生物检测计算的问题——“菌落形成单位”是可计数的，而个体微生物是不能计数的。

2）植物微生物将死亡或者失去生存能力当在标准取样回收程序中对取样片干燥时。

3）这个菌种用于回收研究是不清晰的。

4）微生物限度的设置显著的低于能够引起产品质量问题或工艺性能（如，SIP）的可能，因此，即使回收可能是低的（＜50%），产品质量或工艺性质不能受到影响通过排除回收因子。

对于培训预期取样人员最好有一份单独的擦拭取样 SOP。这将避免可能出现的“程序变形” ，如果擦拭程序内容在每一个方案中重复出现。这也将有助于保证在回收研究中使用同样的取样程序，如同方案中执行的并简化培训。

擦拭培训中一致性的4个关键点：

1）湿润擦拭头的一致性

2）擦拭动作的一致性（包括重叠的笔画）

3）使用压力的一致性

4）适当表面擦拭的一致性

假设使用的正确的擦拭，擦拭的正确数量以及正确的润湿溶液，那么第五个擦拭取样的关键因素包括TOC，强调避免擦拭的外部污染，由于到处存在的有机碳。在培训擦拭取样人员时微生物取样中强调采用 “无菌技术”是有好处的，尤其是取样涉及TOC分析。相对于微生物取样中使用的无菌技术，手套上或者在取样前在邻近的表面使用异丙醇的负面结果（即，人为的提高了 TOC值）应强调。

因为擦拭取样不想人工清洁过程，更高的取决于人员的一致性， 应考虑在已建立的基础上对擦拭取样人员进行再培训和/或再确认。再培训可能包括与初始培训同样的过程，或者只包括原始培训的一部分。再确认通常包括对初始确认的重复。再培训和/或再确认的需求应作为擦拭程序变更控制的一部分进行处理并且作为补救措施，当调查不合格结果时，怀疑发生擦拭取样“操作失误” 。

2、冲洗取样培训的关键问题

对于培训预期的取样人员最好有单独的冲洗取样SOP。对于CIP 系统，冲洗取样程序可能与水系统取样是相同的程序，适当的修正以覆盖工艺设备的取样。

冲洗取样中精确度的最大问题是避免对冲洗样品产生污染，由于取样口和取样口周围的环境。这包括充分的冲洗或者清洁取样点，在取样之前，以及避免由于在手套上使用异丙醇或者使用异丙醇清洁取样口（在取样之前）而对样品产生污染。正如在擦拭取样培训中，在培训冲洗取样人员过程中强调微生物取样中使用“无菌技术”是有好处的，尤其取样涉及TOC 分析。在培训冲洗水取样人员从CIP 循环系统的最终冲洗水取样时，取样的时间是至关重要的。一般的是冲洗水的最后一部分用来取样，但是，如果取样能够代表最差条件，在此之前进行取样也是可接受的。然而，一旦冲洗过程完成，就没有办法返回和收集冲洗水样品（除非进行一个单独的冲洗水取样）。

由于冲洗水取样的一致性较少的依赖于操作人员，再培训和再确认的需求作为冲洗水取样程序变更控制的一部分进行处理，并在不合格结果调查中疑似取样操作失误时进行。

3、目检培训

目检的培训取决于目检是否作为执行程序的一部分或者目检是否是实验室“检测限度”的决定。在任何一种情况下，最好有目检的SOP，以便根据SOP 进行培训。任何目检的检察人员都应有适当的视力测试。

执行方案中关于目检人员的培训，关键点是：

1）进入地点查看

2）适当的光源

3）识别表面残留和表面缺陷之间差异的能力

目检培训的一个重要元素是知道什么时候要求进一步的分析以确定残留的性质。比如，如果设备上发现变红，应注意残留的存在。确定是否是残留导致清洁过程失败是一个单独的决定。实验室“检测限度”确定的目检程序通常与执行方案中的目检不同，因为目的是不同的。目的决定了在什么水平上某一种残留能够始终被观察到跨过标记的表面以关联已知残留水平的目检检测限度低于标记水平。这个程序可以在单独的 SOP 中，或者整合到目检的 SOP中。除了包括在执行方案培训中的相同元素外，这个程序中培训的关键，涉及观察标记的取样片，是仔细区别目测清洁的表面，部分脏污的表面（标记区域的一部分有明显的残留）以及完全脏污的表面。