紫外光谱检测自制熊果酸片剂的含量

韩萌萌 2024-04-30

本研究采用紫外分光光度法测定自制熊果酸片剂中熊果酸含量。以甲醇为溶剂，利用全波长对熊果酸溶液进行全波长扫描，并建立标准曲线。检测结果是熊果酸紫外最大吸收波长为 203.5 nm，回归方程为 y=0.0038x+0.1372，r=0.9987。加样回收率为 95.5%，RSD 为 1.43%。结果表明本方法操作简单、快速、灵敏，线性关系良好，可用于熊果酸片剂的质量控制。

熊果酸（Ursolic acid）又名乌苏酸、乌索酸，属于有机三萜酸，易溶于多种有机试剂如甲醇、乙醇、丁醇、丁酮、氯仿等，但不溶于水及石油醚，结构如图1所示 ^[1]。多种植物中均含有熊果酸，如木犀科植物女贞^[2]、胡颓子科沙棘^[3]、蔷薇科枇杷叶等植物均含有大量的熊果酸。研究表明，熊果酸具有多种药理作用，如抗氧化^[4]、抗炎^[5]、抗纤维化^[6]、抗肿瘤^[7]等。

图1 熊果酸的结构

目前关于熊果酸含量检测有多种方法，如香草醛 - 高氯酸法，该方法操作繁琐，且高氯酸具有很强的腐蚀性，仅适用于实验室的检测；另外是通过高效液相色谱法进行检测，但是仪器价格昂贵。此外，目前市面上并未出售熊果酸片剂药品，因此建立一种片剂中熊果酸含量的测定是非常有必要的。紫外分光光度法是常用于化学药、中成药或中药提取物的分析检测方法，尤其是在有效部位群的含量分析测定中具有独特的优势。因此本实验采用紫外分光光度法检测实验室自制的熊果酸片剂中熊果酸的含量，为熊果酸片剂的质量控制提供实验依据。

实验仪器和试剂

UV-2600紫外-可见分光光度计（日本岛津）；分析电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。色谱甲醇（纯度 >99.9%）购自富宇精细化工有限公司；熊果酸购自阿拉丁生物科技有限公司，CAS 号 : 77-52-1 ；熊果酸片剂为实验室自制（200 mg 含主药 2 mg）。

实验方法

2.1

溶液配制

熊果酸对照品溶液配制方法：精密称取熊果酸标准品2 mg置于10 mL量瓶中，加入甲醇定容至刻度线，摇匀，配置成浓度为 0.2 mg/mL 的熊果酸对照品溶液，置于 4℃备用。

供试品溶液配制方法：取实验室自制熊果酸片剂 20 片，粉碎，精密称定样品粉末 20 mg 置于 25 mL 容量瓶中，甲醇定容至刻度线，超声 10 min，制成2 mg/mL 的溶液，置于 4℃备用，使用时用 0.22 μm 的滤膜进行过滤。

2.2

吸收波长的选择

精密移取上述对照品溶液，在185~400 nm 范围内进行全波长扫描，甲醇为空白对照，选择最大吸收波长 λ，后续含量测定均在最大吸收波长处检测吸光度值。

2.3

标准曲线的建立

精密移取 0.2 mg/mL 的对照品溶液，用甲醇进行等比稀释，稀释成浓度为 100 μg/mL、50 μg/mL、25 μg/mL、12.5 μg/mL 的标准品溶液，在最大吸收波长处测序吸光度值 A，以熊果酸浓度C（μg/mL）为横坐标，吸光度值 A 为纵坐标进行线性回归，并计算相关系数 r值。

2.4

样品含量的测定

精密移取 6 份“2.1”项下供试品溶液，经 0.22 μm 的有机滤膜进行过滤，在最大吸收波长处测序吸光度值 A，通过熊果酸标准曲线计算样品含量，计算平均值及相对标准偏差RSD 值。

2.5

精密度试验

精密移取 6 份“2.1”项下对照品溶液，将其稀释成 100 μg/mL 的溶液，在最大吸收波长处测序吸光度值 A，计算平均值及相对标准偏差RSD 值。

2.6

稳定性试验

精密移取 6 份“2.1”项下供试品溶液，经 0.22 μm 的有机滤膜进行过滤，分别于 0、25 min、50 min、75 min、125 min时测定吸光度值 A，计算平均值及相对标准偏差RSD 值。

2.7

重复性试验

精密移取 6 份“2.1” 项下样品溶液，将其稀释成100 μg/mL 的溶液，在最大吸收波长处测序吸光度值 A，计算平均值及相对标准偏差RSD 值。

2.8

加样回收试验

分别供试品溶液 6 份 0.25 mL，再分别添加 20 μg 的对照品熊果酸，在最大吸收波长处测序吸光度值 A，计算平均值及相对标准偏差RSD 值。

结果

3.1

波长选择

采用 UV-2600 紫外 - 可见分光光度计在 185 ~ 400 nm 范围内进行全波长扫描，结果见图2、图3、图4，熊果酸在203.5 nm 有最大吸收，样品经过滤后紫外吸收峰与熊果酸一致，因此后续实验均采用 λ=203.5 nm 为检测波长。

图2 阴性对照扫描图谱

图3 熊果酸对照品扫描图谱

图4 样品扫描图谱

3.2

标准曲线的绘制

以熊果酸浓度 C（μg/mL）为横坐标，吸光度值 A 为纵坐标进行线性回归，如图 5 所示。计算得出线性回归方程y=0.0038x+0.1372，相关系数 r =0.9987，表明线性良好。

图5 熊果酸标准曲线图

3.3

样品含量测定结果

样品溶液含量测定结果见表1，RSD 值为 1.74% （n=6），表明该片剂含量稳定、均一。

表1 样品含量测定结果

3.4

精密度试验结果

熊果酸对照品溶液精密度试验结果见表2，计算RSD 值为 1.18%（n=6），表明该试验精密度良好。

表2 精密度试验结果

3.5

重复性试验结果

熊果酸对照品溶液重复度试验结果见表3，计算RSD 值为 0.91%（n=6），表明该试验精密度良好。

表3 重复性试验结果

3.6

稳定性试验结果

样品溶液进行稳定性试验结果见表4，计算 RSD 值为 0.84%（n=6），表明该试验精密度良好。

表4 重复性试验结果

3.7

加样回收试验

样品溶液的加样回收率试验结果见表5，计算平均加样回收率为 95.5%，RSD 值为 1.43%（n=6），表明该试验加样回收率较好。

表5 加样回收试验结果

结论

熊果酸作为一种自然来源的成分，因具有广泛的药理作用，备受关注。目前还未出现上市的熊果酸片剂，但是在一些中药保健品中均含有熊果酸。为了更好地检测熊果酸的含量，需要建立一种更加简便、快速、准确的方法。在本实验室通过全波长扫描图片对熊果酸标准品进行波长选择，随后检测实验室自制的熊果酸片剂中熊果酸含量，结果发现，熊果酸的紫外最大吸收波长为 203.5 nm，回归方程为 y=0.0038x+0.1372，r=0.9987，且加样回收率为95.5%，RSD 为 1.43%。以上结果表明该方法可靠、准确、重复性好，且成本低，可适用于常规的熊果酸含量的检测。

参考文献

[1] 侯梦珠，李春玉，赵冬梅，等 . 熊果酸药物的研究进展[J]. 山西化工，2023，43(08): 20-21+31.

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[3] 丁肇俊，叶健文，马佳琪，等 . 沙棘叶化学成分及药理作用研究进展 [J].世界中医药，2023，18(05): 714-720.

[4] 张立攀，赵梦瑶，周莉，等 . 超声辅助提取山茱萸熊果酸工艺优化及其抗氧化和抑菌性 [J]. 食品工业科技，2020，41(11): 181-187.

[5] Wu X，Li H，Wan Z，et al. Thecombination of ursolic acid andempagliflozin relieves diabeticnephropathy by reducing inflammation，oxidative stress and renal fibrosis[J].Biomed Pharmacother，2021，144:112267-112279.

[6] 侯梦珠，李春玉，王丽敏，等 . 熊果酸抗纤维化研究进展 [J]. 广东化工，2023，50(12): 101-102+117.

[7] Khwaza V，Oyedeji O O，AderibigbeB A. Ursolic Acid-Based Derivativesas Potential Anti-Cancer Agents: AnUpdate[J]. Int J Mol Sci，2020，21(16).