实验解析｜蛋白浓缩超滤管的选择原则和注意事项

2024-12-28

超滤管（也称为离心超滤管或超滤离心管）是一种利用离心力驱动，分离液体中不同分子或粒子的膜过滤设备。超滤管主要由盖子、过滤装置（核心为超滤膜）和离心管等部分组成。

可用于浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸（DNA/RNA 样品，单链或双链）、微生物、柱洗脱液和纯化样品的生物样品，纯化组织培养提取物和细胞裂解物中的大分子成分，从反应混合物中去除引物、接头或分子标记物，并在 HPLC 之前去除蛋白质及脱盐、缓冲液置换或洗滤。

一、蛋白浓缩超滤管的选择原则

在选择蛋白浓缩超滤管时，需要遵循以下原则以确保实验的成功和效率：

（1）明确实验需求

目的蛋白分子量：确定需要浓缩或分离的蛋白质的分子量是选择超滤管截留分子量（MWCO）的基础。通常，截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3。例如，若目的蛋白分子量为40 kDa，可以选择10 kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量较小，如10 kDa左右可以选择截留分子量3 kDa的超滤管。
样品体积：预估需要处理的样品体积，以便选择合适的超滤管容量。Millipore等厂商提供了多种容量的超滤管，如0.5 ml、4 ml、15 ml等，以适应不同体积的样品，可根据实验目的选择相应容量的超滤管。

（2）材料兼容性

超滤管通常使用再生纤维素膜或其他高性能材料制成，这些材料具有不同的化学耐受性和物理特性。因此，需要根据实验条件选择合适的材料，以确保超滤管在实验中不会与样品发生反应。

（3）离心机兼容性

不同型号的超滤管可能需要不同类型的离心转子，如水平转子或固定角度转子，根据超滤管型号选择合适的转子。

（4）阅读说明书

在选择超滤管后，务必仔细阅读使用说明书。说明书中会详细介绍超滤管的使用方法、注意事项、化学耐受性等信息，对于确保实验成功至关重要。

二、操作注意事项

在使用蛋白浓缩超滤管进行蛋白浓缩时，需要注意以下事项：

（1）预处理

新买来的有些超滤管是干燥的，使用前需要加入Milli-Q水或其他适当的溶液进行预处理，以确保超滤膜被充分润湿。水量应完全过膜，并在冰浴或冰箱里预冷几分钟。
有的超滤管中的超滤膜含有甘油，如果甘油会影响到后续的实验，可以在使用前用缓冲液或Milli-Q水冲洗超滤管。如果干扰仍然存在，用0.1 N NaOH 冲洗，然后用缓冲液或 Milli-Q水第二次离心。

（2）加入蛋白液