野菊花（FlosChrysanthemiIndici）又名野!@#$%^&*、苦薏，为菊科植物野菊ChrysanthemumindicumL.的干燥头状花序。其性味苦辛，微寒，归肝、心经。具有清热解毒之功能。常用于疔疮痈肿，目赤肿痛，头痛眩晕等病症［1］。绿原酸是野菊花中的主要活性成分之一。据报道，绿原酸具有抗菌、抗病毒、抗脂质过氧化等多种药理活性，并具有显著增强胃肠蠕动和促进胃液分泌的药理作用［2］。鉴于绿原酸具有多种生理活性，对野菊花绿原酸的研究具有重要意义。

为了有效提取绿原酸，探索从野菊花中提取绿原酸的最优化工艺条件，笔者采用正交实验分别考察了水浴提取和超声波辅助提取两种提取方法对野菊花中绿原酸提取工艺进行正交优化，以期找到最佳的制备工艺。

1仪器与材料

1.1仪器

UV/VIS916型分光光度计(澳大利亚GBC)，ZK-82A型真空干燥箱(上海实验仪器总厂)，FZ102型微型植物试样粉碎机 (河北省黄骅市振兴机电仪器厂)，SX8200H型台式超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，HH-S2系列恒温水浴锅(江苏省金坛市环宇科学仪器厂)。

1.2材料

绿原酸标准品购自中国药品生物制定检定所，野菊花购自邦健药房（50℃下烘干3h，粉碎后备用），其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备准确称取绿原酸对照品5.2mg置于250ml量瓶中，用70%的乙醇溶液溶解，定容即得。

2.2测定波长的选择取对照品溶液1ml，置于10ml量瓶中，用70%的乙醇定容。以70%乙醇溶液为参比液，于紫外分光光度计上在200～400nm范围内进行扫描最大吸收波长，结果在329.6nm处有最大吸收峰，由此选择329.6nm作为测定波长。

2.3方法学考察

2.3.1标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0ml于 10只10ml量瓶，以70%乙醇定容。于紫外分光光度计上在λ=329.6nm处测定其吸光度。以吸光度A为纵坐标，绿原酸浓度C为横坐标，绘制标准曲线。经线性回归得回归方程为：A＝51.133C－0.0058，r=0.9997，结果显示绿原酸在0.416～4.576g·L-1范围内具有良好的线性关系。

2.3.2精密度实验精确称取野菊花约1g，加入10ml在70℃水浴提取60min，准确吸取提取液1ml，置于10ml量瓶中，以70%乙醇定容。以70%乙醇作空白，测定其吸光度。连续测定6次，RSD=0.72%，表明仪器精密度较好。

2.3.3稳定性实验准确吸取“2.3.2”项所得提取液1ml，置于10ml量瓶中，以70%乙醇定容。以70%乙醇作空白，分别于0，10，20，30，40，50min测定其吸光度，连续测定6次，RSD=0.38%，表明提取液在1h内较稳定。

2.3.4重复性实验精密称取野菊花粉末约1g，按“2.3.2”项法平行制备3份提取液，按“2.3.2”项方法实验，RSD=0.25%，说明方法重复性较好。

2.3.5加样回收率实验

向已知含量的野菊花中加入不同量的绿原酸对照品进行实验，用紫外分光光度计测定其吸光度，得出绿原酸含量。平均回收率为100.89%，RSD为1.45%，表明方法回收率较好。

2.4正交实验设计［3，4］

2.4.1水浴提取法

在粒度、提取工艺相同的条件下，考察水浴温度、乙醇浓度、液固比、提取时间等因素，选用L9(34)正交表安排实验。见表1。表1水浴提取因素水平（略）

2.4.2超声波提取法在粒度、提取工艺相同条件下，考察浸渍时间、乙醇浓度、液固比、超声时间等因素，选用L9(34)正交表安排实验。见表2。表2超声波法因素水平（略）

2.5野菊花的测定［5］精密称取野菊花约1g，置于100ml圆底烧瓶中，按“2.4”项进行正交实验，提取液抽滤，滤液定量转移至 100ml量瓶中，70%乙醇定容。精密吸取滤液1ml于10ml量瓶中，按标准曲线制备方法测定其吸光度，由标准吸收曲线计算出绿原酸含量。结果见表 3。表3正交实验方案及结果分析（略）

2.6方差分析

由表3可知，水浴提取法的最佳提取条件为：A3B2C2D1，即液固比为12∶1的70%乙醇于80℃水浴提取40min。在此条件下，绿原酸含量达到0.35%。从极差分析知各因素对绿原酸提取的影响大小顺序分别是提取温度>液固比>乙醇浓度>提取时间。

超声提取法的最佳提取条件为：A2B2C2D3，即液固比为15∶1的60%乙醇预浸渍40min，超声提取45min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到0.36%。从极差分析知各因素对绿原酸提取的影响大小顺序分别是乙醇浓度>浸渍时间>超声时间>液固比。

3结论

通过正交实验，确定了水浴提取法的最佳提取条件为：液固比为12∶1的70%乙醇于80℃水浴提取40min。在此条件下，绿原酸含量达到0.35%。超声提取法的最佳提取条件为：液固比为15∶1的60%乙醇预浸渍40min，超声提取45min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到 0.36%。

水浴法与超声法中，影响绿原酸的提取的主要因素基本相同，所不同的是超声条件下提取效果优于水浴。其原因可为：①超声的空化作用对细胞膜的破坏有助于绿原酸的释放与溶出；②超声波使浸提剂和提取物不断振荡，有助于溶质的扩散；③超声的热效应使水介质温度基本维持在60℃，对样品有水浴的效果。